Cuadro 1. Distribución de fases móviles y reveladores cromatográficos, según los metabolitos estudiados
Componentes Fases móviles Reveladores
Antraquinonas y cumarinas Acetato de etilo: metanol: agua (10:1:5) Solución etanólica de KOH 10%, Solución de ácido bórico 8% y Solución de ácido oxálico 10% (2:1) Alcaloides Cloroformo: metanol: amoniaco (4: 1: 0: 1) Reactivo de Dragendorff. Solución ácido sulfúrico 10% Aminoácidos y aminas n-propanol: acetato de etilo: agua: ácido acético (4:3:2:1) Ninhidrina Azucares y oligosacáridos n-propanol: acetato de etilo: agua: ácido acético (4:3:2:1) A- naphtoil-ácido sulfúrico Flavonoides Tolueno: acetato de etilo: acetona: ácido fórmico (5:2:2:1); cloroformo: metanol: amoniaco (4:1:0:1) Solución de ácido bórico 10% y solución de ácido oxálico 10% (2:1) Glucósidos terpénicos Cloroformo: metanol: amoniaco (4:1:0:1); n-butanol: etanodiol: amoniaco: agua (7: 2: 2: 3) Anisaldehído - ácido sulfúrico Terpenos Tolueno: acetato de etilo (95:5) Anisaldehído: ácido sulfúrico

de CV, México) durante 30 min, hasta obtener 2mL, de los cuales se tomaron alícuotas de 10µL de cada muestra y se aplicaron a las placas cromatográficas (marca Merck),12, 13 con las distintas fases móviles, según el metabolito por identificar (Cuadro 1).

Se llevó a cabo la caracterización de los principales compuestos obtenidos en el estudio fitoquímico mediante espectrofotometría, utilizando dos espectrómetros: el Milton Roy Spectronic 1201 y el Perkin Elmer 599. Los espectros se obtuvieron mediante un equipo avance DRX Bruker 300 Mhz con software: Iris 6.5, xwinnmr 3.0. (2000). Las formas estructurales de los compuestos se verificaron empleando un programa de computación comercial ChemDraw, versión 12.0 (Addlink software científico, Madrid, 2012).

Fraccionamiento biodirigido

Una parte del extracto metanólico se sometió a fraccionamiento primario por cromatografía de columna abierta.7 Se obtuvo un total de 21 fracciones con un volumen de 175 ml cada una, las cuales se asociaron por similitud cromatográfica, obteniéndose 5 fracciones, que se destinaron a las pruebas de hipoglucemia en un modelo experimental de ratas hiperglicémicas. En el Cuadro 2 se muestra el número de fracciones, sus combinaciones y el rendimiento de estas, expresado en gramos.

Animales experimentales

Los protocolos aplicados se diseñaron siguiendo las buenas prácticas de manejo y empleo de animales de laboratorio.14,15

Se emplearon 44 ratas macho de la cepaC57BL/6, las cuales fueron adquiridas en el Bioterio del Instituto Venezolano de Investigaciones Científicas (IVIC). Los pesos de las ratas oscilaron entre 300 y 370 g. Previo a la realización del experimento, la ratas fueron colocadas en jaulas individuales y se les sometió a una temperatura de entre 21-22°C, en condiciones de ciclo claro/oscuro de 12 h.13,16 Se les suministró una dieta comercial granulada (Protinal®) y la ingesta de agua fuead libitum.

Inducción experimental de la diabetes y cuantificación de la glucosa “in vivo”

A las ratas se les administró, a través de la vena coccígea, una solución de aloxano monohidratado al 10% (v/v), en dosis única de 160mg/kg de peso corporal durante 5 días, diagnosticándose hiperglicemia cuando la concentración de glucosa sanguínea fuese >180mg/dL. Se evaluó la glicemia a partir de muestras seriadas tomadas de la vena lateral de la cola, y la sangre se procesó con bandas reactivas para análisis, utilizando un glucómetro (Optium Xcced, Abott).

Protocolo experimental

Se utilizaron 44 animales, los cuales fueron subdivididos en 11 grupos, a saber: Grupo I(control): cuatro ratas a las cuales se les suministró 1 mL de solución fisiológica de NaCl + dextrosa, ambas al 0,45% v/v; Grupo II: cuatro ratas: 160 mg/kg de aloxano monohidratado (AM) por kilogramo de peso corporal (PC); Grupo III: cuatro ratas: 160 mg/kg peso corporal de aloxano monohidratado + 400 µg/kg peso corporal de sitagliptina®;

Cuadro 3. Distribución de la población de estudio, según el protocolo experimental
Grupo Tratamiento Dosis Vía de administración
I Ratas Control Solución Salina 1 mL i/p II Ratas hiperglicémicas Aloxano monohidratado 10% 160 mg/Kg i/p III* Sitagliptina® 400µg/Kg Oral IV Ocimun basilicum 1,0 g/Kg i/p V Ocimun basilicum 1,5 g/Kg i/p VI Ocimun basilicum 2,0 g/Kg i/p VII F1 200 mg/Kg i/p VIII F2 200 mg/Kg i/p IX F3 200 mg/Kg i/p X F4 200 mg/Kg i/p XI F5 200 mg/Kg i/p
*Fármaco control hipoglicemiante; i/p: intraperitoneal.

derivados de los ácidos grasos con distintas características químicas, como ésteres y aldehídos. Según investigadores,11 serían los responsables del aroma que caracteriza esta especie vegetal. No obstante, otros autores9 difieren de estas afirmaciones y señalan que estos compuestos han sido escasamente reportados en la albahaca y se sintetizan a partir de componentes en altas concentraciones, como los ácidos grasos insaturados y poliinsaturados por diferentes rutas bioquímicas. Posiblemente, el compuesto 1-monoglicérido, aislado en este estudio, constituye un precursor de estos metabolitos.

En este ensayo, también se obtuvo un alcaloide indólico, el 18-metoxicarbonil-3,4-dehidroibogamina (Figura 1), conocido como catarantina, el cual es de interés químico, ya que se emplea en la síntesis de anhidrovinblastina, un bisindólico antitumoral. Este compuesto es un constituyente principal de la familia vegetal de las Apocynáceas que se ha investigado como alternativa en la fitoterapia del cáncer linfático,18 incluso se refiere como integrante de complejos proteicos en pro de las enterohormonas,19 lo que destaca su particular interés biomédico.

Asimismo, se aisló el monoterpeno1-isopropil-4-metil-benzeno, conocido como p-cimeno, derivado de la deshidrogenación de algunos terpenos. Este compuesto ha sido reportado 20, 21 como tratamiento en la hiperplasia prostática benigna sintomática (BPH) y en las infecciones de las vías urinarias. La bibliografía lo refiere como responsable de modificaciones covalentes y demás reacciones bioquímicas que inducen a disminuciones drásticas de la concentración plasmática de glucosa, incluso se ha demostrado la estimulación de los gránulos insulinógenos secretores de las células beta del páncreas, incrementando

A B C
Figura 1. A. Compuesto purificado del extracto metanólico. 18-metoxicarbonil-3,4-didehidroibogamina. B. Compuesto purificado del extracto metanólico: 1-Isopropil-4-metil-benzeno. C. Compuesto purificado del extracto metanólico 5,7,3´-trihydroxi-3,6,4´-trimetoxiflavona